CDKN2A/p16 Plasmide Double Nickase (m): sc-419610-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CDKN2A/p16 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m) e il CDKN2A/p16 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cdkn2a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CDKN2A/p19ARF Antibody (5-C3-1): sc-32748
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CDKN2A/p16 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN2A/p16 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Cdkn2a codifica CDKN2A/p16, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti che limita l’attività di CDK4/6 e contribuisce a mantenere il controllo del checkpoint del ciclo cellulare G1/S dipendente da RB. Riducendo la fosforilazione delle proteine della famiglia RB, p16 coordina programmi di arresto proliferativo e si integra con la segnalazione associata alla senescenza in risposta a stress oncogenico e danno tissutale. La regolazione di Cdkn2a è strettamente collegata a vie che governano l’invecchiamento cellulare, la proliferazione di cellule staminali e progenitrici e l’integrità dei checkpoint. Alterazioni dell’espressione o della funzione di Cdkn2a/p16 sono ampiamente utilizzate come indicatore molecolare di senescenza, dell’attivazione delle vie oncosoppressorie e della disregolazione del ciclo cellulare nei modelli murini.
CDKN2A/p16 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdkn2a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdkn2a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdkn2a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdkn2a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.