Plasmide Double Nickase (m) CDKN2A/p16: sc-419610-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CDKN2A/p16 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CDKN2A/p16 Double Nickase (m) et le plasmide CDKN2A/p16 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cdkn2a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CDKN2A/p19ARF Antibody (5-C3-1): sc-32748
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CDKN2A/p16 | sc-419610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CDKN2A/p16 | sc-419610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Cdkn2a code CDKN2A/p16, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui limite l’activité de CDK4/6 et contribue à maintenir le contrôle, dépendant de RB, du point de contrôle G1/S du cycle cellulaire. En restreignant la phosphorylation des protéines de la famille RB, p16 coordonne des programmes d’arrêt de la prolifération et s’articule avec la signalisation associée à la sénescence en réponse au stress oncogénique et aux lésions tissulaires. La régulation de Cdkn2a est étroitement liée aux voies qui gouvernent le vieillissement cellulaire, la prolifération des cellules souches et progénitrices, ainsi que l’intégrité des points de contrôle. Une expression ou une fonction altérée de Cdkn2a/p16 est largement utilisée comme indicateur moléculaire de la sénescence, de l’activation des voies suppresseuses de tumeur et de la dérégulation du cycle cellulaire dans des modèles murins.
CDKN2A/p16 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdkn2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdkn2a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdkn2a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdkn2a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.