Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk8 (m): sc-435217
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Cdk8 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Cdk8, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cdk8 Antibody (D-9): sc-13155
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk8 (m) | sc-435217 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La kinase cycline-dépendante 8 (Cdk8) est une kinase sérine/thréonine associée au complexe Mediator, qui régule la transcription dépendante de l’ARN polymérase II en phosphorylant des facteurs de transcription et des composants de la machinerie transcriptionnelle. Dans les cellules de souris, Cdk8 intègre des signaux issus de voies telles que Wnt/β-caténine, TGF-β/SMAD et MAPK afin de moduler la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et l’expression de gènes répondant au stress. Par le contrôle de l’activité des enhancers et des promoteurs, Cdk8 influence les sorties transcriptionnelles métaboliques et inflammatoires et peut façonner des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Une activité CDK8 dérégulée a été associée à une régulation transcriptionnelle aberrante dans des contextes oncogéniques et du développement, faisant de Cdk8 une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel et des interactions entre voies de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdk8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdk8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdk8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdk8.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdk8 pour l'étude de la signalisation de Cdk8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cdk8 essentiels à la fonction de Cdk8
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdk8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Cdk8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cdk8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdk8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Cdk8 plasmide HDR (m) et le Cdk8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdk8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdk8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.