Plasmide CRISPR/Cas9 KO CDK11 (h): sc-405330

Présentation

CDK19 code une kinase dépendante des cyclines qui agit au sein du module kinase du Mediator pour moduler la transcription dépendante de l’ARN polymérase II ainsi que la phosphorylation de substrats associés à la transcription. En régulant les programmes d’initiation et d’élongation de la transcription, CDK19 influence la progression du cycle cellulaire, l’expression de gènes sensibles au stress et des réseaux transcriptionnels dépendants des signaux, liés notamment à la voie MAPK et à d’autres voies. Une activité ou une expression dérégulée de CDK19 a été associée à une altération du contrôle de la prolifération et à un remaniement des programmes transcriptionnels observés dans de multiples contextes cancéreux et autres troubles prolifératifs. CDK11 est une kinase sérine/thréonine multifonctionnelle impliquée dans la régulation du cycle cellulaire, l’épissage du pré-ARNm et le contrôle transcriptionnel, ce qui en fait un modèle pertinent pour étudier les interactions entre réseaux de kinases et les mécanismes de signalisation compensatoire dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CDK11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDK19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDK19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDK19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CDK11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDK19 pour l'étude de la signalisation de CDK11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDK19 essentiels à la fonction de CDK11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDK19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CDK11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CDK11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDK19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CDK11 plasmide HDR (h) et le CDK11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDK19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDK19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.