Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc7 (m): sc-419586

Présentation

Cdc7 (cell division cycle 7) code une kinase sérine/thréonine qui constitue la sous-unité catalytique du complexe DDK, un régulateur central de l’initiation de la réplication de l’ADN. Cdc7 phosphoryle des composants de l’hélicase MCM afin de favoriser l’activation des origines de réplication et de coordonner la progression de la phase S avec le contrôle des points de contrôle, en intégrant des signaux issus des voies de réponse au stress réplicatif. Par ses rôles dans la duplication du génome et la stabilité des fourches de réplication, l’activité de Cdc7 influence l’intégrité chromosomique et la dynamique du cycle cellulaire dans les tissus prolifératifs. Une signalisation Cdc7 dérégulée a été associée à une prolifération aberrante et à des phénotypes d’instabilité génomique fréquemment étudiés en biologie du cancer et en recherche sur la réponse aux dommages de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdc7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdc7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdc7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdc7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdc7 pour l'étude de la signalisation de Cdc7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cdc7 essentiels à la fonction de Cdc7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdc7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdc7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cdc7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdc7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdc7 plasmide HDR (m) et le Cdc7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdc7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdc7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.