Plásmido Doble Nickase (h) Cdc6: sc-400796-NIC

CDC6 codifica la ATPasa humana Cdc6, un componente central del complejo de prerreplicación que coopera con ORC y CDT1 para cargar la helicasa MCM2–7 en los orígenes de replicación, habilitando la síntesis de ADN durante la fase G1. La actividad de Cdc6 se coordina con el control dependiente de CDK y la señalización de los puntos de control de replicación para asegurar una duplicación del genoma una sola vez por ciclo celular, vinculando la activación de los orígenes de replicación con la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN. La expresión o función desregulada de CDC6 puede favorecer el estrés replicativo, la inestabilidad genómica y la entrada aberrante en fase S, procesos que se estudian con frecuencia en trastornos proliferativos y en biología del cáncer. Como factor de licenciamiento de la replicación, Cdc6 también es relevante para investigaciones sobre dinámica de la cromatina, selección de orígenes y mecanismos que suprimen la rereplicación.

Cdc6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDC6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDC6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDC6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDC6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.