CD9 Plasmide Double Nickase (h): sc-400252-NIC

CD9 è una proteina di superficie cellulare della famiglia delle tetraspanine che organizza microdomini di membrana associandosi a integrine, recettori della superfamiglia delle immunoglobuline e altre tetraspanine, per coordinare eventi di adesione, motilità e fusione di membrana. Nelle cellule umane, CD9 contribuisce all'endocitosi e al traffico vescicolare e modula gli output di segnalazione legati al rimodellamento del citoscheletro, inclusi percorsi che influenzano la migrazione cellulare e le interazioni con la matrice extracellulare. CD9 è inoltre arricchita nelle vescicole extracellulari ed è ampiamente utilizzata come marcatore di esosomi, a supporto di studi sulla comunicazione intercellulare e sulla biogenesi delle vescicole. Alterazioni dell'espressione e della localizzazione di CD9 sono state associate a invasività deregolata, interazioni con le cellule immunitarie e comportamento metastatico in molteplici contesti tumorali, rendendola rilevante per modelli meccanicistici di malattia.

CD9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.