CD8-β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400950

Descripción general

CD8B codifica CD8-β, una glucoproteína transmembrana de tipo I que forma un heterodímero con CD8-α para constituir el correceptor CD8 en los linfocitos T citotóxicos y en subpoblaciones de timocitos. Al unirse al MHC de clase I y asociarse con LCK, CD8-β incrementa la intensidad de la señalización del TCR, apoyando la activación específica de antígeno, la formación de la sinapsis inmunológica y las vías posteriores que controlan la proliferación, la producción de citocinas y la diferenciación de efectores citolíticos. La expresión de CD8B contribuye a la selección tímica y al mantenimiento de la identidad de las células T CD8+, influyendo en la vigilancia inmunitaria y en las respuestas a infecciones. La señalización desregulada del correceptor CD8 y los patrones alterados de expresión de CD8B son relevantes para estudios de autoinmunidad, inflamación crónica, inmunología tumoral y fenotipos de agotamiento de células T.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD8-β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CD8B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CD8B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CD8B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD8-β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CD8B para la investigación de la señalización de CD8-β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CD8B críticos para la función de CD8-β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CD8B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD8-β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CD8-β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CD8B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD8-β (h) y el plásmido HDR CD8-β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CD8B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CD8B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.