Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD8-α Double Nickase Plasmid (h): sc-400372-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD8-α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD8-α Double-Nickase-Plasmid (h) und CD8-α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD8A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD8-α: sc-7970
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD8-α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD8-α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD8A kodiert CD8-α, ein transmembranes Glykoprotein vom Typ I, das auf T-Lymphozyten und einer Untergruppe von NK-Zellen CD8αα-Homodimere oder CD8αβ-Heterodimere bildet. CD8-α fungiert als Korezeptor für die MHC-Klasse-I-restringierte Antigenerkennung, indem es mit dem TCR-Komplex assoziiert und LCK rekrutiert, um die frühe TCR-Signalübertragung zu verstärken und so die Differenzierung zytotoxischer Effektorzellen sowie die Bildung der immunologischen Synapse zu unterstützen. Über seinen Einfluss auf nachgeschaltete Signalwege wie die ZAP70-Phosphorylierung, MAPK-Signalgebung und calciumabhängige Transkriptionsprogramme trägt CD8A dazu bei, antigen-spezifische Antworten und die Immunüberwachung zu formen. Veränderte CD8A-Expression und Muster der Infiltration durch CD8+ T-Zellen werden häufig als immunologische Korrelate in Studien zu Infektionen, Autoimmunität und der Tumormikroumgebung verwendet und liefern Hinweise auf Mechanismen der Immunflucht und T-Zell-Dysfunktion.
CD8-α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD8A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD8A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD8A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD8A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.