Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD79B: sc-401760-ACT

CD79B code la sous-unité Ig-β (B29) du complexe du récepteur des antigènes des lymphocytes B (BCR), formant avec CD79A un hétérodimère de signalisation indispensable à l’expression du BCR à la surface cellulaire et à la transduction du signal déclenchée par l’antigène. Après la liaison de l’antigène, la phosphorylation de l’ITAM de CD79B initie l’activation en aval de SYK et la propagation du signal via les voies BTK, PI3K–AKT et NF-κB/MAPK, régulant l’activation, la survie et la différenciation des lymphocytes B. Une expression de CD79B altérée ou une compétence de signalisation modifiée peut remodeler l’activité de la voie du BCR et la dynamique de signalisation des récepteurs immunitaires. La dérégulation des composants de la signalisation du BCR, dont CD79B, est fréquemment étudiée dans le contexte du développement des lymphocytes B, des dysfonctionnements immunitaires et de la biologie des hémopathies malignes B.

CD79B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD79B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD79B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD79B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD79B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD79B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD79B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD79B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD79B dans les cellules tumorales présentant une expression de CD79B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.