CD44 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400209-ACT

Human CD44 kodiert ein multifunktionales Zelloberflächen‑Glykoprotein, das Hyaluronan und andere Liganden der extrazellulären Matrix bindet und so Zelladhäsion, Migration und das Homing von Lymphozyten reguliert. CD44 ist an der Umgestaltung des Zytoskeletts und an der Signaltransduktion über Signalwege beteiligt, in die ERM‑Proteine, Rho‑Familien‑GTPasen sowie Crosstalk mit Rezeptortyrosinkinasen eingebunden sind, und prägt dadurch Antworten auf Entzündungsreize und Gewebemikroumgebungen. Alternatives Spleißen und posttranslationale Modifikationen diversifizieren CD44‑Isoformen und stimmen Ligandenbindung und Signalausgänge fein ab. Eine dysregulierte CD44‑Expression und die Nutzung bestimmter Isoformen werden häufig in Kontexten wie Tumorinvasion und Metastasierung, epithelial‑mesenchymaler Transition, Fibrose und Immunzell‑Trafficking untersucht.

CD44 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD44-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD44 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD44-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD44-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD44-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD44-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD44-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD44-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD44-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.