CD3-δ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401519-ACT

CD3D kodiert CD3-δ, eine zentrale Komponente des T‑Zell‑Rezeptor(TCR)–CD3‑Komplexes, die für die antigenabhängige T‑Zell‑Aktivierung und Signalweiterleitung erforderlich ist. CD3-δ ist an der Assemblierung und Oberflächenexpression des TCR‑Komplexes beteiligt und überträgt Signale über sein zytoplasmatisches ITAM‑Motiv, wobei es LCK/ZAP70 sowie nachgeschaltete Signalwege wie LAT/SLP‑76, PLCγ1–NFAT, NF‑κB und MAPK/ERK einbindet, um Proliferation und Zytokinprogramme zu koordinieren. Eine veränderte CD3D‑Expression oder ‑Funktion kann die Thymozytenentwicklung, die Signalübertragungskompetenz des TCR und die Immunhomöostase stören, was CD3D für Studien zu Immundefizienz, Immundysregulation und Tumor‑Immun‑Interaktionen relevant macht. Als linienbestimmender T‑Zell‑Marker wird CD3-δ zudem häufig genutzt, um Signalisierungsschwellen und Aktivierungszustände in humanen Immunzellen zu modellieren.

CD3-δ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD3D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD3-δ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD3D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD3D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD3-δ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD3D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD3-δ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD3-δ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD3D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.