CD27L Double Nickase Plasmid (h): sc-402625-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD27L Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD27L Double-Nickase-Plasmid (h) und CD27L Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD70 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD27L: sc-365539
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD27L Double Nickase Plasmid (h) | sc-402625-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD27L Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402625-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD70, auch bekannt als CD27-Ligand (CD27L), ist ein Typ-II-Transmembranprotein aus der TNF-Superfamilie, das vor allem auf aktivierten antigenpräsentierenden Zellen sowie auf bestimmten Lymphozyten-Subpopulationen exprimiert wird. Durch die Bindung an CD27 auf T- und B-Zellen vermittelt CD70 kostimulatorische Signale, die Aktivierung, Proliferation, Überleben und Differenzierung von Lymphozyten prägen und damit Keimzentrumsreaktionen sowie die Entwicklung zytotoxischer Effektoren unterstützen. Die CD70–CD27-Signalgebung greift in NF-κB- und MAPK-abhängige Transkriptionsprogramme ein und trägt zur Regulation der Immunhomöostase während entzündlicher Prozesse bei. Eine fehlregulierte CD70-Expression wurde mit veränderten Zuständen der Immunaktivierung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Tumor-Immunmikroumgebungen sowie der Biologie chronisch-entzündlicher Erkrankungen untersucht.
CD27L Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD70-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD70 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD70-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD70-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.