Plásmido Doble Nickase (h) CD27: sc-401938-NIC

CD27 es una molécula coestimuladora de la superfamilia de receptores del TNF que se expresa en células T activadas, células B de memoria y subpoblaciones de células NK, donde su interacción con CD70 amplifica la activación impulsada por el antígeno. La señalización de CD27 promueve la supervivencia, proliferación y diferenciación de los linfocitos a través de vías mediadas por TRAF que convergen en las cascadas de NF-κB y MAPK, modulando la producción de citocinas y la memoria inmunitaria adaptativa. La actividad desregulada de CD27–CD70 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis inmunitaria, inflamación crónica e interacciones entre tumores y el sistema inmunitario, y los defectos hereditarios en CD27 pueden perjudicar la inmunidad antiviral y las respuestas humorales. Como receptor de superficie con una biología de ligando bien caracterizada, CD27 se estudia con frecuencia en los mecanismos de activación inmunitaria, agotamiento y decisiones de destino de los linfocitos.

CD27 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD27 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD27. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD27. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD27 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.