CD229 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404895-ACT

LY9 kodiert CD229, einen Immunrezeptor der SLAM-Familie, der überwiegend auf Lymphozyten exprimiert wird und dort während der Immunaktivierung Zell-Zell-Interaktionen sowie die Signalierungsschwellen moduliert. CD229 ist an immunregulatorischen Signalwegen beteiligt, die mit der T- und B‑Zellrezeptor-Signalübertragung verknüpft sind, und beeinflusst über adaptorabhängige Signalkaskaden Zytokinantworten, Proliferation und Differenzierung. Indem CD229 die Kommunikation von Lymphozyten in Keimzentren und peripheren Immunnischen mitprägt, trägt es zur Immunhomöostase und Toleranz bei. Eine fehlregulierte LY9/CD229-Expression oder -Signalübertragung wurde mit veränderten Immunphänotypen in Verbindung gebracht und im Kontext der Biologie immunvermittelter sowie hämatologischer Erkrankungen untersucht.

CD229 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LY9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD229 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LY9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LY9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD229-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LY9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD229-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD229-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LY9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.