Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD206/Mannose Receptor/MMR: sc-421707-ACT

Mrc1 code pour CD206 (récepteur du mannose, MMR), un récepteur « scavenger » de type lectine C fortement exprimé par les macrophages et les cellules dendritiques, qui se lie à des glycanes contenant du mannose, du fucose et de la N‑acétylglucosamine présents sur les agents pathogènes et sur des glycoprotéines endogènes. CD206 régule l’endocytose et la phagocytose médiées par récepteur, orientant la capture et le traitement des antigènes, et contribuant à la surveillance immunitaire innée ainsi qu’à l’homéostasie tissulaire. Il est fréquemment utilisé comme marqueur de la polarisation des macrophages activés de façon alternative (de type M2) et participe à des voies associées à la résolution de l’inflammation, au remodelage de la matrice extracellulaire et aux réponses fibrotiques. Des programmes macrophagiques associés à CD206, lorsqu’ils sont dérégulés, sont impliqués dans des études portant sur les maladies inflammatoires chroniques, la biologie des infections, l’immunologie du microenvironnement tumoral et le remodelage métabolique des tissus dans des modèles murins.

CD206/Mannose Receptor/MMR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mrc1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD206/Mannose Receptor/MMR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mrc1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mrc1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD206/Mannose Receptor/MMR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mrc1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD206/Mannose Receptor/MMR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD206/Mannose Receptor/MMR dans les cellules tumorales présentant une expression de Mrc1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.