Plásmido Doble Nickase (h) CD19: sc-400719-NIC

CD19 es una glicoproteína transmembrana restringida a las células B que funciona como correceptor, amplificando la señalización del receptor de células B (BCR) al organizar complejos de señalización con CD21 y CD81. Mediante la modulación de las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK y dependientes del calcio, CD19 ayuda a establecer los umbrales de activación que gobiernan la proliferación, la diferenciación y las respuestas de anticuerpos de las células B. La expresión de CD19 está estrechamente vinculada al compromiso de linaje de las células B y a la dinámica del centro germinal, y su desregulación se utiliza con frecuencia como característica molecular en estudios de neoplasias de células B y de patología mediada por el sistema inmunitario. Como marcador de superficie con funciones de señalización bien definidas, CD19 ofrece un punto de entrada manejable para diseccionar redes de señalización de células B y la selección impulsada por antígenos.

CD19 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD19 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD19. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD19. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD19 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.