Plásmido CRISPR de Activación (m) CD163: sc-429989-ACT

El gen murino Cd163 codifica CD163, un receptor “scavenger” restringido a macrófagos de la familia SRCR que se une a complejos hemoglobina–haptoglobina y promueve su endocitosis, apoyando el catabolismo del hemo y el reciclaje de hierro a través de la vía de HO-1. CD163 es un marcador característico de los macrófagos activados alternativamente (tipo M2) y participa en programas de depuración que moldean la resolución de la inflamación, las redes de citocinas y la remodelación tisular. Su expresión se modula por señales inflamatorias e interactúa con la señalización inmunitaria innata y el tráfico fagocítico, influyendo en los estados de polarización de los macrófagos. Las alteraciones en los niveles de CD163 se utilizan con frecuencia para contextualizar la participación de los macrófagos en inflamación crónica, remodelación fibrótica, disfunción metabólica, infección y biología de macrófagos asociados a tumores en modelos murinos.

CD163 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cd163 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD163 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cd163 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cd163, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD163. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cd163 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD163 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD163 en células tumorales con expresión de Cd163 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.