Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD161 (h): sc-405895

Présentation

KLRB1 code CD161 (KLRB1), un récepteur de type lectine C principalement exprimé par certains sous-ensembles de cellules NK et de lymphocytes T, notamment les lymphocytes T invariants associés aux muqueuses (MAIT) et des populations de type Th17. CD161 participe à des signalisations immunorégulatrices et à la modulation de la cytotoxicité et de la production de cytokines via des voies médiées par des récepteurs qui façonnent les réponses immunitaires innées et adaptatives. Une expression altérée de KLRB1/CD161 est associée à des états d’activation immunitaire et à des contextes inflammatoires, et ce marqueur est fréquemment utilisé pour phénotyper des sous-populations lymphocytaires fonctionnellement distinctes dans des études sur les infections, l’auto-immunité et l’immunologie des tumeurs. En tant que récepteur de surface lié à des programmes effecteurs tels que des réponses orientées vers l’IL-17 et le tropisme tissulaire, CD161 constitue un point d’entrée pratique pour disséquer la différenciation et la fonction des lymphocytes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD161 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLRB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLRB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLRB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD161.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLRB1 pour l'étude de la signalisation de CD161, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLRB1 essentiels à la fonction de CD161
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLRB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD161 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD161 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLRB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD161 plasmide HDR (h) et le CD161 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLRB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLRB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.