Plásmido Doble Nickase (h) CD154: sc-401682-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD154 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD154 (h) y el plásmido de doble nickasa CD154 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD40LG. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD154 Anticuerpo (F-1): sc-374635
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD154 | sc-401682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD154 | sc-401682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40LG codifica CD154 (ligando de CD40), una proteína de membrana de tipo II expresada de forma transitoria en células T CD4+ activadas, que se une a CD40 en células B, células dendríticas y macrófagos para coordinar la comunicación cruzada entre la inmunidad adaptativa y la innata. La señalización CD154–CD40 promueve la activación de las células B, la formación de centros germinales, la recombinación de cambio de clase de las inmunoglobulinas y la “licencia” de las células dendríticas mediante programas transcripcionales impulsados por NF-κB y MAPK. Este eje también modula la producción de citocinas y la señalización coestimuladora en las respuestas de células T colaboradoras foliculares y en las vías de presentación de antígenos. La actividad o expresión desregulada de CD40LG se asocia con fenotipos de inmunodeficiencia e hiperactivación inmunitaria, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la inmunidad humoral, la inflamación y la regulación del microambiente linfoide.
CD154 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD40LG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD40LG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD40LG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD40LG alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.