Plásmido Doble Nickase (m) CD138/SDC1/Syndecan-1: sc-423235-NIC

Sdc1 codifica el sindecán‑1 (CD138), un proteoglucano transmembrana de heparán sulfato que regula la adhesión célula–célula y célula–matriz, la presentación de factores de crecimiento y el secuestro de quimiocinas en la superficie celular. Al unirse a componentes de la matriz extracelular y a ligandos como miembros de las familias FGF y VEGF, CD138 modula vías de señalización que incluyen MAPK/ERK, PI3K/AKT y la dinámica de las adhesiones focales dependientes de integrinas, influyendo en la proliferación, la migración y la organización de la barrera epitelial. En tejidos de ratón, Sdc1 contribuye a las interacciones de las células inmunitarias y a la reparación de heridas mediante el control de señales inflamatorias y la remodelación de la matriz extracelular. La expresión o el desprendimiento (shedding) desregulados de CD138 se asocian con estados alterados de adhesión y señalización relevantes para la biología del cáncer, la inflamación y la investigación sobre homeostasis tisular.

CD138/SDC1/Syndecan-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sdc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sdc1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sdc1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sdc1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.