CCK-AR Plasmide Double Nickase (h): sc-402419-NIC

CCKAR codifica per il recettore A della colecistochinina (CCK-AR), un GPCR di classe A che lega peptidi della colecistochinina per regolare la fisiologia digestiva e neuroendocrina. Dopo il legame con il ligando, CCK-AR si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, la mobilizzazione di Ca²⁺ mediata da inositolo trisfosfato, la segnalazione della protein chinasi C e le risposte a valle MAPK/ERK che modulano secrezione, motilità ed eccitabilità cellulare. Nei tessuti umani, la segnalazione di CCKAR contribuisce al coordinamento della contrazione della colecisti, al rilascio di enzimi pancreatici e ai circuiti legati alla sazietà, integrando il rilevamento dei nutrienti con input ormonali e neuronali. La segnalazione GPCR deregolata e le alterazioni dell’espressione di CCKAR sono state indagate in contesti che includono fenotipi metabolici e cambiamenti funzionali gastrointestinali, a supporto della sua rilevanza per studi di biologia delle malattie incentrati su specifiche vie di segnalazione.

CCK-AR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCKAR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCKAR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCKAR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCKAR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.