Plásmido Doble Nickase (h) CCK-AR: sc-402419-NIC

CCKAR codifica el receptor de colecistoquinina A (CCK-AR), un GPCR de clase A que se une a péptidos de colecistoquinina para regular la fisiología digestiva y neuroendocrina. Tras la unión del ligando, CCK-AR se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa Cβ, la movilización de Ca²⁺ mediada por inositol trifosfato, la señalización de la proteína quinasa C y respuestas posteriores de MAPK/ERK que modulan la secreción, la motilidad y la excitabilidad celular. En tejidos humanos, la señalización de CCKAR contribuye a coordinar la contracción de la vesícula biliar, la liberación de enzimas pancreáticas y los circuitos relacionados con la saciedad, integrando la detección de nutrientes con señales hormonales y neuronales. La desregulación de la señalización de GPCR y los cambios en la expresión de CCKAR se han investigado en contextos como fenotipos metabólicos y alteraciones funcionales gastrointestinales, lo que respalda su relevancia para estudios de biología de enfermedades centrados en vías de señalización.

CCK-AR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CCKAR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CCKAR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CCKAR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CCKAR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.