CCDC111 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404310

Übersicht

PRIMPOL (auch als CCDC111 bekannt) kodiert PrimPol, eine Primase-Polymerase, die die Toleranz gegenüber DNA-Schäden fördert, indem sie die DNA-Synthese stromabwärts von Läsionen neu startet (Repriming) und den Neustart von Replikationsgabeln unterstützt. Diese Aktivität trägt während der S-Phase zur Genomstabilität bei und überschneidet sich mit Signalwegen, die an der Replikationsstressantwort, der postreplikativen Reparatur sowie an der Aufrechterhaltung der Integrität mitochondrialer und nukleärer DNA beteiligt sind. Entgleister Replikationsstress und eine beeinträchtigte Läsionsüberbrückung stehen mit der Anhäufung von Mutationen und chromosomaler Instabilität in Verbindung, wodurch PRIMPOL ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Mechanismen ist, die die krebsspezifische Genomwartung beeinflussen. Zudem wird die PRIMPOL-Funktion häufig im Kontext oxidativer Schäden, UV-induzierter Läsionen und von Polymerase-Wechselereignissen bei der Erholung gestoppter Replikationsgabeln untersucht.

Das CCDC111 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRIMPOL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRIMPOL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRIMPOL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCDC111-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRIMPOL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCDC111-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRIMPOL-Exone abzielen, die für die CCDC111-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRIMPOL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCDC111 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CCDC111 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRIMPOL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCDC111 HDR-Plasmid (h) und CCDC111 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRIMPOL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRIMPOL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.