Plásmido Doble Nickase (h) CCDC109A: sc-413850-NIC

MCU (CCDC109A) codifica la subunidad formadora del poro del complejo uniportador mitocondrial de calcio, que media la captación de Ca²⁺ a través de la membrana interna mitocondrial. Al modular los transitorios mitocondriales de Ca²⁺, MCU conecta la señalización citosólica con la fosforilación oxidativa, la activación de deshidrogenasas del ciclo del TCA (Krebs) y la homeostasis de especies reactivas de oxígeno, influyendo en la producción de ATP y la flexibilidad metabólica. El manejo de Ca²⁺ dependiente de MCU también se relaciona con la transición de permeabilidad mitocondrial y con vías vinculadas a la apoptosis, afectando las respuestas al estrés y las decisiones sobre el destino celular. La actividad desregulada de MCU se ha asociado con alteraciones en la bioenergética y la señalización de Ca²⁺ en contextos como la disfunción cardiometabólica, la neurodegeneración y la biología tumoral, por lo que es un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de la señalización mitocondrial.

CCDC109A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCU en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCU. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCU. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCU alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.