CBP20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404124

Übersicht

NCBP2 kodiert CBP20, die kleine Untereinheit des nukleären Cap-Bindungskomplexes, der die 7‑Methylguanosin‑Kappe auf neu entstehenden Transkripten der RNA‑Polymerase II erkennt. Indem CBP20 die Cap-Erkennung mit der RNA‑Prozessierung koppelt, unterstützt es das Spleißen der Prä‑mRNA, die 3′‑Endbildung, den nukleären Export sowie RNA‑Überwachungswege einschließlich des nonsense‑vermittelten mRNA‑Abbaus (NMD). Über diese Funktionen trägt NCBP2 dazu bei, Genexpressionsprogramme und die Integrität des Transkriptoms während Zellwachstum und Stressantworten zu koordinieren. Eine Fehlregulation der cap‑abhängigen RNA‑Metabolisierung und der mRNA‑Qualitätskontrolle wurde mit onkogenen Transkriptionszuständen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch NCBP2 ein geeigneter Knotenpunkt zur Untersuchung krankheitsassoziierter Mechanismen der RNA‑Prozessierung ist.

Das CBP20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NCBP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NCBP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NCBP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CBP20-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NCBP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CBP20-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NCBP2-Exone abzielen, die für die CBP20-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NCBP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CBP20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CBP20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NCBP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CBP20 HDR-Plasmid (h) und CBP20 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NCBP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NCBP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.