Cbl Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400561-ACT

O gene CBL humano codifica a proteína Cbl, uma ligase E3 de ubiquitina e proteína adaptadora que reduz a atividade de tirosina-quinases de receptores e não receptores ativadas ao promover a ubiquitinação e o tráfego endocítico. Por meio dos seus domínios TKB e RING finger, a Cbl modula o fluxo de sinalização nas vias de EGFR, PDGFR e receptores imunes, moldando as saídas de MAPK/ERK, PI3K–AKT e JAK/STAT que controlam proliferação, diferenciação e respostas a citocinas. O CBL integra mecanismos de feedback negativo na sinalização de células hematopoéticas e imunes e contribui para a regulação da dinâmica do citoesqueleto e da migração celular. A desregulação de CBL, incluindo expressão alterada ou variantes funcionais, está associada a sinalização aberrante de tirosina-quinases em neoplasias e distúrbios relacionados ao sistema imune, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de atenuação de sinal.

Cbl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CBL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cbl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CBL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CBL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cbl. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CBL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cbl no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cbl em células tumorais com expressão de CBL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.