Cbl Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400561-ACT

Il gene umano **CBL** codifica Cbl, una ligasi E3 dell’ubiquitina e proteina adattatrice che riduce l’attività delle tirosin-chinasi recettoriali e non recettoriali attivate promuovendone l’ubiquitinazione e il traffico endocitico. Attraverso i domini TKB e RING finger, Cbl modula il flusso di segnalazione nelle vie di EGFR, PDGFR e dei recettori immunitari, plasmando gli output di MAPK/ERK, PI3K–AKT e JAK/STAT che controllano proliferazione, differenziamento e risposte citochiniche. CBL integra un feedback negativo nella segnalazione delle cellule ematopoietiche e immunitarie e contribuisce alla regolazione della dinamica del citoscheletro e della migrazione cellulare. La disregolazione di CBL, inclusi cambiamenti di espressione o varianti funzionali, è associata a una segnalazione aberrante delle tirosin-chinasi in neoplasie e disturbi immuno-correlati, supportandone l’impiego in studi meccanicistici dell’attenuazione del segnale.

Cbl Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CBL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cbl Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CBL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CBL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cbl. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CBL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cbl nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cbl nelle cellule tumorali con espressione di CBL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.