Plásmido Doble Nickase (h) CBARA1/MICU1: sc-418304-NIC

MICU1 (CBARA1) codifica una subunidad reguladora de unión a Ca2+ del complejo del uniportador mitocondrial de calcio, que ayuda a establecer el umbral de captación de Ca2+ mitocondrial en respuesta a señales de calcio citosólico. Al modular la homeostasis mitocondrial de Ca2+, MICU1 influye en la fosforilación oxidativa, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y el acoplamiento entre la señalización de Ca2+ y la salida metabólica, con efectos posteriores sobre la apoptosis y la adaptación al estrés. La alteración de la función de MICU1 se ha relacionado con fenotipos neuromusculares y del neurodesarrollo, en consonancia con su papel en el mantenimiento de la estabilidad bioenergética mitocondrial en tejidos excitables. Por ello, MICU1 se estudia ampliamente en vías que conectan la señalización mitocondrial, el metabolismo celular y las respuestas transcripcionales dependientes de Ca2+.

CBARA1/MICU1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MICU1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MICU1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MICU1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MICU1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.