Plasmide CRISPR d'Activation (h) CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2: sc-401054-ACT

CNR2 code le récepteur cannabinoïde 2 (CB2), un GPCR couplé à Gi/o principalement exprimé dans les lignées immunitaires et hématopoïétiques, qui module le niveau d’inflammation et la migration des cellules immunitaires. Lorsqu’il est activé, CB2 inhibe l’adénylate cyclase, réduisant ainsi la signalisation cAMP/PKA, et peut également engager les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant la production de cytokines, la chimiotaxie et les programmes de survie cellulaire. La signalisation de CB2 s’articule avec les réseaux de médiateurs lipidiques et le métabolisme des endocannabinoïdes, ce qui affecte les états d’activation des macrophages et des microglies ainsi que, plus largement, les réponses immunitaires innées et adaptatives. Une expression ou une signalisation dérégulée de CNR2 a été associée à l’inflammation d’origine immunitaire, aux processus neuro-inflammatoires et à la dynamique du microenvironnement tumoral et immunitaire, ce qui soutient son intérêt comme cible mécanistique en recherche en immunologie et en neurobiologie.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CNR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.