Plasmide CRISPR d'Activation (h) caveolin-3: sc-400569-ACT

Le gène humain **CAV3** code la caveoline‑3, un composant structural des caveoles enrichi dans le muscle, qui organise des microdomaines membranaires et sert de plateforme d’ancrage pour des protéines de signalisation au niveau du sarcolemme. La caveoline‑3 influence la mécanotransduction, l’homéostasie lipidique et les voies associées aux récepteurs en modulant la compartimentation des canaux ioniques et des kinases impliqués dans l’excitabilité et le métabolisme musculaires. Une perturbation de l’expression de **CAV3** ou de l’architecture des caveoles est associée à des dysfonctionnements des muscles squelettiques et du muscle cardiaque, notamment certaines formes de dystrophie musculaire et de cardiomyopathie, ce qui souligne son importance pour la stabilité des fibres musculaires et les réponses au stress. Ces propriétés font de la caveoline‑3 un point d’entrée utile pour étudier le trafic membranaire, la transduction du signal et la différenciation des cellules musculaires dans des systèmes modèles humains.

caveolin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAV3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caveolin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAV3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAV3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caveolin-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAV3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caveolin-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caveolin-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAV3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.