cathepsin B Plasmide Double Nickase (m): sc-419873-NIC

Il gene murino **Ctsb** codifica la catepsina B, una proteasi cisteinica lisosomiale che media il turnover proteico intracellulare e contribuisce alla proteolisi endosomiale–lisosomiale, all’autofagia e al processamento degli antigeni. Al di fuori dei lisosomi, la catepsina B può influenzare il rimodellamento della matrice extracellulare attraverso reti di proteasi, modellando la migrazione cellulare e i programmi di rimodellamento tissutale. Un’attività deregolata della catepsina B è stata associata, in modelli sperimentali, alla segnalazione infiammatoria, a difetti di proteostasi legati alla neurodegenerazione e al rimodellamento del microambiente tumorale, rendendo **Ctsb** un bersaglio frequentemente utilizzato per studiare patologie dipendenti dalle proteasi. Come parte della più ampia famiglia delle catepsine, interagisce con vie che controllano la biogenesi lisosomiale, la maturazione del fagosoma e meccanismi di morte cellulare legati alla permeabilizzazione della membrana lisosomiale.

cathepsin B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ctsb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ctsb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ctsb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ctsb interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.