Plasmide CRISPR d'Activation (h) catalase: sc-400353-ACT

Le gène humain **CAT** code la catalase, une enzyme héminique peroxysomale qui décompose le peroxyde d’hydrogène en eau et en oxygène, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et à l’ADN. En contrôlant le flux de H2O2, la catalase contribue à établir un « tonus » rédox qui influence les réseaux de signalisation sensibles aux ROS, la communication peroxysome–mitochondrie et les réponses cellulaires au stress métabolique et inflammatoire. Des altérations de l’activité de la catalase ont été associées à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour les dysfonctionnements cardiométaboliques, les maladies neurodégénératives et la biologie tumorale, où le déséquilibre rédox peut remodeler la prolifération, la survie et la stabilité génomique. **CAT** est donc largement utilisé comme nœud mécanistique pour étudier les défenses antioxydantes, l’homéostasie des peroxysomes et les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

catalase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

catalase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de catalase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de catalase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie catalase dans les cellules tumorales présentant une expression de CAT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.