Plasmide CRISPR d'Activation (h) caspase-8: sc-400147-ACT

Le gène humain **CASP8** code la caspase‑8, une protéase initiatrice à cystéine qui relie l’activation des récepteurs de mort au déclenchement des cascades de caspases en aval et des programmes de mort cellulaire régulée. Elle agit au niveau du **DISC** pour propager l’apoptose extrinsèque et participe au contrôle de la nécroptose via des interactions avec **FADD**, **cFLIP**, **RIPK1** et **RIPK3**, modulant ainsi les réponses inflammatoires et au stress. **CASP8** influence également la signalisation immunitaire et les décisions de destin cellulaire en aval des voies **TNFR** et **Fas**, avec des effets dépendant du contexte sur la production de cytokines et la survie. Une dérégulation de l’activité ou de l’expression de la caspase‑8 a été associée à une sensibilité modifiée à l’apoptose, à des perturbations immunitaires et à des mécanismes d’échappement à la mort cellulaire pertinents en cancérologie.

caspase-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASP8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caspase-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASP8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASP8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caspase-8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASP8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caspase-8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caspase-8 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASP8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.