caspase-14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419464
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- caspase-14 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico caspase-14, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: caspase-14 p10 Anticuerpo (B-3): sc-515259
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
caspase-14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419464 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Casp14 de ratón codifica la caspasa-14, un miembro atípico de la familia de las caspasas que contribuye a la diferenciación terminal de los queratinocitos más que a la señalización apoptótica. La actividad de la caspasa-14 favorece la formación de la barrera epidérmica al promover el procesamiento de sustratos asociados a la diferenciación e influir en los factores naturales de hidratación derivados de la filagrina en el estrato córneo. Debido a su papel en la cornificación y la homeostasis cutánea, la expresión o actividad alteradas de Casp14 se han asociado con una función de barrera deteriorada y fenotipos cutáneos inflamatorios en modelos experimentales. Por lo tanto, la caspasa-14 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar programas de diferenciación epitelial, respuestas al estrés de la barrera y vías vinculadas a la queratinización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Casp14 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Casp14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Casp14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína caspase-14.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Casp14 para la investigación de la señalización de caspase-14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Casp14 críticos para la función de caspase-14
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Casp14 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido caspase-14 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido caspase-14 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Casp14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR caspase-14 (m) y el plásmido HDR caspase-14 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Casp14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Casp14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.