caspase-14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419464

Panoramica

Il gene Casp14 del topo codifica la caspasi-14, un membro atipico della famiglia delle caspasi che contribuisce alla differenziazione terminale dei cheratinociti piuttosto che alla segnalazione apoptotica. L’attività della caspasi-14 supporta la formazione della barriera epidermica promuovendo l’elaborazione di substrati associati alla differenziazione e influenzando i fattori idratanti naturali derivati dalla filaggrina nello strato corneo. Attraverso il suo ruolo nella cornificazione e nell’omeostasi cutanea, un’alterata espressione o attività di Casp14 è stata associata, in modelli sperimentali, a una compromissione della funzione di barriera e a fenotipi cutanei infiammatori. La caspasi-14 fornisce quindi un punto d’ingresso meccanicistico per studiare i programmi di differenziazione epiteliale, le risposte allo stress della barriera e le vie legate alla cheratinizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Casp14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Casp14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Casp14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caspase-14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Casp14 per lo studio della segnalazione di caspase-14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Casp14 critici per la funzione di caspase-14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Casp14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal caspase-14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal caspase-14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Casp14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal caspase-14 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR caspase-14 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Casp14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Casp14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.