casein kinase Iγ1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404681-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- casein kinase Iγ1 CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- casein kinase Iγ1 CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom casein kinase Iγ1 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom casein kinase Iγ1 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der CSNK1G1-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
casein kinase Iγ1 CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-404681-ACT | 20 µg | $397.00 |
CSNK1G1 kodiert die Casein-Kinase Iγ1, eine membranassoziierte Serin/Threonin-Kinase aus der CK1-Familie, die phosphorylierungsabhängige Signalwege und den Proteinumsatz moduliert. CK1-Isoformen regulieren zahlreiche Prozesse, darunter Rezeptortransport, zirkadiane Zeitsteuerung und stressresponsive Signalübertragung, und greifen in Signalwege wie Wnt/β-Catenin, Hedgehog und DNA-Schadensantworten ein, indem sie zentrale Komponenten dieser Wege phosphorylieren. Indem CSNK1G1 die Dynamik der Phosphosignalgebung an Membranen und in zytosolischen Komplexen mitprägt, beeinflusst es die Zellzykluskontrolle, die Zellpolarität und homöostatische Rückkopplungsschleifen. Eine Fehlregulation der CK1-Aktivität wurde mit veränderter proliferativer Signalgebung und weiteren krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was CSNK1G1 für mechanistische Studien zur kinasegetriebenen Umverdrahtung von Signalwegen nützlich macht.
casein kinase Iγ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CSNK1G1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
casein kinase Iγ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CSNK1G1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CSNK1G1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen casein kinase Iγ1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CSNK1G1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von casein kinase Iγ1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des casein kinase Iγ1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CSNK1G1-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.