CARP Lentiviral Activation Particles (h): sc-401842-LAC

Das humane ANKRD1 kodiert das kardiale Ankyrin-Repeat-Protein (CARP), einen stress- und dehnungsresponsiven transkriptionellen Kofaktor, der die Integrität der Sarkomere mit der nukleären Genregulation verknüpft. CARP ist an Mechanotransduktionsprogrammen in quergestreifter Muskulatur beteiligt, moduliert die Expression kontraktiler und extrazellulärmatrixbezogener Gene und koordiniert Umbauantworten auf veränderte Belastung. Es interagiert mit strukturellen und Signalproteinen in der Z-Scheiben-/I-Banden-Region und ist an Signalwegen beteiligt, die Myofibrillogenese, hypertrophe Signalisierung und zelluläre Stressantworten steuern. Eine dysregulierte ANKRD1-Expression und/oder -Funktion wurde mit remodelingassoziierten Phänotypen bei Kardiomyopathien in Verbindung gebracht, was ANKRD1 zu einem relevanten Ziel für Studien kardialer Gennetzwerke, der Muskeldifferenzierung und krankheitsassoziierter transkriptioneller Zustände macht.

CARP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ANKRD1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CARP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ANKRD1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CARP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ANKRD1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.