Particules Lentivirales d'Activation (h) CARP: sc-401842-LAC

Le gène humain **ANKRD1** code la **cardiac ankyrin repeat protein** (CARP), un cofacteur transcriptionnel sensible au stress et à l’étirement, qui relie l’intégrité sarcomérique à la régulation des gènes nucléaires. CARP participe aux programmes de mécanotransduction dans le muscle strié, en modulant l’expression de gènes contractiles et de la matrice extracellulaire, et en coordonnant les réponses de remodelage aux variations de charge. Elle interagit avec des composants structuraux et de signalisation dans la région disque Z/bande I et s’insère dans des voies contrôlant la myofibrillogenèse, la signalisation hypertrophique et les réponses au stress cellulaire. Une expression et/ou une fonction dérégulée d’ANKRD1 a été associée à des phénotypes de remodelage liés aux cardiomyopathies, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux de gènes cardiaques, de la différenciation musculaire et des états transcriptionnels associés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales CARP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ANKRD1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CARP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ANKRD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CARP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ANKRD1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.