Plasmide CRISPR/Cas9 KO CARD 9 (h): sc-402214

Présentation

Le membre 9 de la famille des domaines de recrutement des caspases (CARD9) est une protéine adaptatrice exprimée principalement dans les cellules myéloïdes, qui couple les récepteurs de reconnaissance des motifs aux voies de signalisation inflammatoires en aval. Elle agit au sein du complexe CARD9–BCL10–MALT1 pour favoriser l’activation des voies NF-κB et MAPK après la détection de composants fongiques et bactériens via des récepteurs de lectines de type C tels que Dectin-1, modulant ainsi la production de cytokines et la polarisation de l’immunité innée. CARD9 influence également les réponses liées à l’inflammasome et la défense de l’hôte au niveau des barrières muqueuses en coordonnant des programmes effecteurs antimicrobiens. Des variations génétiques ou une signalisation CARD9 altérée ont été associées à une susceptibilité aux infections fongiques invasives et à des phénotypes inflammatoires, ce qui appuie son utilisation comme nœud mécanistique en immunologie et dans les recherches axées sur le microbiome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CARD 9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CARD9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CARD9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CARD9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CARD 9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CARD9 pour l'étude de la signalisation de CARD 9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CARD9 essentiels à la fonction de CARD 9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CARD9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CARD 9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CARD 9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CARD9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CARD 9 plasmide HDR (h) et le CARD 9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CARD9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CARD9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.