Plásmido CRISPR de Activación (m) CARD 9: sc-436080-ACT

Mouse Card9 codifica CARD9, una proteína adaptadora citosólica que conecta los receptores de reconocimiento de patrones con la señalización inflamatoria aguas abajo en células mieloides. CARD9 es un mediador clave de las vías de los receptores de lectina tipo C y contribuye a la activación de los programas de NF-κB y MAPK, que moldean la producción de citocinas, las respuestas antimicrobianas y los estados de diferenciación mieloide. A través de su papel en la transducción de señales de la inmunidad innata, la actividad alterada de CARD9 se asocia con una defensa del hospedador desregulada y con fenotipos relacionados con la inflamación en modelos experimentales, lo que la hace relevante para estudios de biología de infecciones y homeostasis inmunitaria. Por ello, Card9 se utiliza con frecuencia para investigar la lógica de señalización proximal al receptor y las salidas transcripcionales en macrófagos, células dendríticas y células de la línea de neutrófilos.

CARD 9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Card9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CARD 9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Card9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Card9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CARD 9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Card9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CARD 9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CARD 9 en células tumorales con expresión de Card9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.