Plasmide CRISPR/Cas9 KO Carbonyl reductase 3 (h): sc-406552

Présentation

CBR3 code la carbonyl réductase 3, une oxydoréductase cytosolique dépendante du NADPH qui catalyse la réduction de composés carbonylés réactifs, notamment des aldéhydes et des cétones générés lors du métabolisme des xénobiotiques et du stress oxydatif. En modulant l’équilibre rédox cellulaire et la détoxification des carbonyles, CBR3 contribue aux processus métaboliques de phase I/II et aide à limiter l’accumulation d’intermédiaires électrophiles susceptibles d’endommager les protéines, les lipides et l’ADN. Les variations d’activité de CBR3 ont été étudiées dans le cadre de différences de prise en charge de produits endogènes de peroxydation lipidique et de divers substrats de petite taille, reliant cette enzyme à des voies pertinentes pour les réponses au stress et l’adaptation métabolique. Une activité altérée des carbonyl réductases est fréquemment explorée en biologie du cancer, en pharmacologie et dans des modèles de toxicologie, où l’état rédox et le traitement des métabolites influencent la survie et le phénotype cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Carbonyl reductase 3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CBR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CBR3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CBR3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Carbonyl reductase 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CBR3 pour l'étude de la signalisation de Carbonyl reductase 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CBR3 essentiels à la fonction de Carbonyl reductase 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CBR3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Carbonyl reductase 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Carbonyl reductase 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CBR3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Carbonyl reductase 3 plasmide HDR (h) et le Carbonyl reductase 3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CBR3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CBR3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.