Plásmido CRISPR de Activación (h) CaMKII gamma: sc-400681-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) CaMKII gamma es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) CaMKII gamma incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR CaMKII gamma (h) y el plásmido de activación CRISPR CaMKII gamma (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de CAMK2G. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CaMKII gamma Anticuerpo (8G10C1): sc-517278
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) CaMKII gamma | sc-400681-ACT | 20 µg | $397.00 |
El CAMK2G humano codifica CaMKII gamma, una quinasa de serina/treonina dependiente de Ca2+/calmodulina que traduce los transitorios de calcio intracelular en programas de fosforilación que regulan la plasticidad sináptica, el acoplamiento excitación–transcripción, la dinámica del citoesqueleto y el tráfico vesicular. CaMKII gamma participa en la señalización de CaMK con efectos aguas abajo sobre la función de los canales iónicos, respuestas transcripcionales vinculadas a CREB y la comunicación cruzada con las vías MAPK y PI3K/AKT. En contextos no neuronales, CAMK2G contribuye a la proliferación, migración y respuestas al estrés reguladas por calcio, sustentando funciones amplias en el control del estado celular. La actividad desregulada de CaMKII y la señalización de calcio se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como con redes de señalización alteradas en biología del cáncer, lo que convierte a CAMK2G en un nodo útil para estudios mecanísticos.
CaMKII gamma El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAMK2G sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
CaMKII gamma El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAMK2G en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAMK2G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaMKII gamma. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAMK2G y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaMKII gamma en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaMKII gamma en células tumorales con expresión de CAMK2G silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.