Plásmido Doble Nickase (h) calsequestrin 2: sc-402912-NIC

CASQ2 codifica la calsequestrina 2, una proteína de unión a Ca2+ de alta capacidad y afinidad moderada localizada en la luz del retículo sarcoplásmico de los cardiomiocitos, donde amortigua el Ca2+ y ayuda a moldear el acoplamiento excitación–contracción. Al interactuar con los complejos del receptor de rianodina y con proteínas accesorias luminales, la calsequestrina 2 contribuye a la dinámica de liberación de Ca2+, a la estabilidad de los depósitos y a la señalización dependiente de calcio que coordina la contracción y la relajación cardíacas. La alteración de la función de CASQ2 se asocia con un manejo intracelular aberrante del Ca2+ y con fenotipos arritmogénicos desencadenados por el estrés, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar la homeostasis del Ca2+ en el retículo sarcoplásmico. Por ello, CASQ2 se utiliza ampliamente en investigaciones sobre electrofisiología cardíaca, redes de ciclado de calcio y mecanismos de susceptibilidad hereditaria a las arritmias.

calsequestrin 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CASQ2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CASQ2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CASQ2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CASQ2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.