Calretinin Plasmide Double Nickase (h): sc-401389-NIC

Il gene umano **CALB2** codifica la **calretinina**, una proteina legante il calcio di tipo **EF-hand** che tampona il Ca2+ intracellulare e modella l’eccitabilità calcio-dipendente, la trasmissione sinaptica e la regolazione dell’espressione genica dipendente dall’attività. La calretinina è arricchita in specifiche popolazioni di interneuroni ed è anche espressa in alcuni tessuti periferici selezionati, dove contribuisce alla dinamica del citoscheletro e al traffico vescicolare tramite vie di segnalazione regolate dal Ca2+. **CALB2** è comunemente impiegato come marcatore molecolare dell’identità dei sottotipi neuronali e della differenziazione mesoteliale, collegando la sua espressione a studi sull’organizzazione dei circuiti neurali e sui programmi di linea cellulare epiteliale. Una deregolazione dell’espressione di **CALB2** e alterazioni dell’omeostasi del calcio sono state associate a contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché alla biologia tumorale in alcuni tipi di tessuto, a supporto della sua utilità nella ricerca meccanicistica.

Calretinin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CALB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CALB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CALB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CALB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.