Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Calpastatin: sc-401502-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Calpastatin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Calpastatin (h) y el plásmido de doble nickasa Calpastatin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CAST. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Calpastatin Anticuerpo (A-1): sc-376547
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Calpastatin | sc-401502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Calpastatin | sc-401502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano CAST codifica la calpastatina, el inhibidor endógeno y altamente específico de las proteasas de cisteína dependientes de calcio calpaína-1 y calpaína-2. Al restringir la proteólisis limitada mediada por calpaínas, la calpastatina ayuda a regular la remodelación del citoesqueleto, el recambio de adhesiones focales, el tráfico de membranas y eventos de transducción de señales vinculados a la dinámica de Ca2+ y a cascadas de fosforilación. La actividad de CAST influye en la proteostasis y en programas de supervivencia celular al modular el clivaje de sustratos implicados en apoptosis, inflamación y homeostasis neuronal y muscular. Un desequilibrio en la regulación calpaína–calpastatina se ha asociado con vías relevantes para la neurodegeneración, las respuestas al daño cardiovascular y la invasión de células cancerosas, lo que respalda a CAST como un nodo mecanístico para estudiar la proteólisis regulada por Ca2+.
Calpastatin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAST en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAST. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAST. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAST alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.