Plásmido Doble Nickase (h) Calpain reg: sc-403478-NIC

CAPNS1 codifica la pequeña subunidad reguladora necesaria para la estabilidad y la actividad de los complejos ubicuos de proteasas cisteína calpaína-1 y calpaína-2. La señalización de las calpaínas media una proteólisis limitada de proteínas del citoesqueleto y de señalización, modulando el recambio de las adhesiones focales, la dinámica de membrana y la remodelación dependiente de calcio durante la migración celular, la progresión del ciclo celular y la apoptosis. A través del corte de sustratos implicados en las vías de NF-κB, MAPK y asociadas a integrinas, CAPNS1 puede influir en la señalización inflamatoria y en las respuestas al estrés. La actividad desregulada de las calpaínas se ha relacionado con la invasividad de células cancerosas, la neurodegeneración y la fisiopatología cardiovascular y metabólica, lo que convierte a CAPNS1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la proteostasis y de las redes de señalización impulsadas por el calcio.

Calpain reg El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAPNS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAPNS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAPNS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAPNS1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.