Calpain 6 Double Nickase Plasmid (m): sc-419444-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calpain 6 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calpain 6 Double-Nickase-Plasmid (m) und Calpain 6 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Capn6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calpain 6 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419444-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Capn6** kodiert Calpain 6 (CAPN6), ein atypisches Mitglied der Calpain-Familie, dem eine wesentliche katalytische Aktivität fehlt, das jedoch weiterhin als regulatorisches Gerüst im Zytoskelett fungiert. CAPN6 beeinflusst die Stabilität von Mikrotubuli, den Umbau von Aktin und die Zellmotilität und ist damit an Signalwegen beteiligt, die zytoskelettale Dynamik, Vesikeltransport und zelluläre Differenzierungsprogramme steuern. In sich entwickelnden Geweben und in myogenen Kontexten wurde CAPN6 mit der Regulation von Proliferations- und Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Gewebemorphogenese und -reparatur relevant macht. Veränderte CAPN6-Expression wurde bei krankheitsassoziierten Remodeling-Phänotypen beschrieben, was seine Untersuchung in Modellen für Fibrose, Krebszellinvasion sowie neuromuskuläre oder entwicklungsbedingte Auffälligkeiten unterstützt, ohne damit klinische Ergebnisse zu implizieren.
Calpain 6 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Capn6-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Capn6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Capn6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Capn6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.