Calnexin Double Nickase Plasmid (h): sc-400154-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calnexin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calnexin Double-Nickase-Plasmid (h) und Calnexin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CANX abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Calnexin: sc-23954
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calnexin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400154-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calnexin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400154-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche CANX-Gen kodiert Calnexin, ein Lektin-Chaperon der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER), das monoglukosylierte N‑gebundene Glykane bindet, um die Faltung und Qualitätskontrolle neu synthetisierter Glykoproteine zu fördern. Calnexin wirkt im Calnexin/Calreticulin-Zyklus zusammen mit ERp57, um die Bildung von Disulfidbrücken, die Retention fehlgefalteter Substrate und Trafficking-Entscheidungen im sekretorischen Weg zu koordinieren. Über seine Rolle in der ER-Proteostase steht CANX in Verbindung mit der Unfolded-Protein-Response, dem ER-assoziierten Abbau (ERAD) und zellulären Stress-Signalwegen, die Antigenpräsentation und Programme zum Zellüberleben umgestalten können. Eine dysregulierte Calnexin-abhängige Faltung und ER-Stress werden häufig im Kontext von Proteinfehlfaltungs-Erkrankungen, metabolischer Entzündung und onkogen bedingten Anforderungen an die Sekretion untersucht, wodurch CANX einen funktionellen Knotenpunkt für mechanistische Analysen von Signalwegen darstellt.
Calnexin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CANX-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CANX abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CANX-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CANX-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.