Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CAD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403028
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CAD El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CAD, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CAD Anticuerpo (F-11): sc-374067
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CAD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403028 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DFFB codifica la DNasa activada por caspasas (CAD), la endonucleasa responsable de la fragmentación internucleosomal del ADN durante la apoptosis. En las células viables, CAD se mantiene inactiva mediante su unión a su inhibidor y chaperona ICAD (DFFA), y se activa tras la escisión de ICAD dependiente de la caspasa-3, lo que permite la degradación de la cromatina y el desmantelamiento nuclear apoptótico. Esta actividad nucleasa conecta las vías intrínseca y extrínseca de la apoptosis con el control de la integridad del genoma al garantizar una eliminación ordenada del ADN durante la muerte celular programada. La desregulación de la función CAD/ICAD puede alterar la ejecución de la apoptosis y se ha investigado en contextos de transformación oncogénica, homeostasis de células inmunitarias y degeneración tisular, donde se implican programas de muerte celular alterados.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CAD (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DFFB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DFFB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DFFB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CAD.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DFFB para la investigación de la señalización de CAD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DFFB críticos para la función de CAD
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DFFB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CAD CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CAD CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DFFB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CAD (h) y el plásmido HDR CAD (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DFFB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DFFB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.