CA VIII Double Nickase Plasmid (h): sc-403750-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CA VIII Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CA VIII Double-Nickase-Plasmid (h) und CA VIII Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CA8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CA VIII: sc-166626
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CA VIII Double Nickase Plasmid (h) | sc-403750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA VIII Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Carboanhydrase VIII (CA VIII), kodiert durch das humane Gen **CA8**, ist ein nicht-katalytisches Mitglied der Carboanhydrase-Familie, das intrazelluläre Signalwege moduliert statt die Hydratation von CO₂ zu katalysieren. CA VIII bindet an den Inositol-1,4,5-trisphosphat-Rezeptor Typ 1 (ITPR1) und hemmt ihn, wodurch die IP₃-abhängige Ca²⁺-Freisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum geprägt wird und damit neuronale Erregbarkeit, synaptische Plastizität und die motorische Koordination des Kleinhirns beeinflusst werden. Über seine Wirkung auf Ca²⁺-regulierte Signalwege, einschließlich CaMK- und Calcineurin-abhängiger Transkriptionsprogramme, trägt CA8 zur homöostatischen Kontrolle der Kalziumsignalgebung bei. Genetische Störungen oder Fehlregulation von CA8 wurden mit Kleinhirnfunktionsstörungen und der Ataxie-assoziierten Neurobiologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen der Kalziumsignalgebung in neuronalen Systemen macht.
CA VIII Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CA8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CA8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CA8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CA8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.