C5L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410578

Übersicht

C5AR2 kodiert C5L2, einen atypischen Komplementrezeptor, der das Anaphylatoxin C5a sowie C5a des-Arg bindet und dadurch die komplementgetriebene Leukozytensignalgebung und den Entzündungsgrundtonus prägt. Im Gegensatz zum kanonischen C5aR1 wird C5L2 häufig als nicht G‑Protein‑gekoppelt beschrieben und kann β‑Arrestin‑vermittelte Signalwege, Rezeptor‑Crosstalk sowie nachgeschaltete, mit MAPK/NF‑κB assoziierte Antworten in myeloiden und gewebsständigen Zellen modulieren. Über seine Rolle in Komplement- und angeborenen Immunwegen beeinflusst C5AR2 Chemotaxis, Zytokinproduktion und Auflösungsprogramme, die sich mit kardiometabolischer Entzündung und Gewebeschädigungsantworten überschneiden. Eine veränderte C5AR2‑Aktivität oder ‑Expression wurde in Kontexten einer sepsisähnlichen systemischen Entzündung, Atherosklerose und metabolischer Störungen untersucht, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt in Modellen entzündlicher Erkrankungen stützt.

Das C5L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C5AR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C5AR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C5AR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C5L2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C5AR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C5L2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C5AR2-Exone abzielen, die für die C5L2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C5AR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C5L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C5L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C5AR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C5L2 HDR-Plasmid (h) und C5L2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C5AR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C5AR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.