C4a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402428

Übersicht

Komplementkomponente 4A (C4A) kodiert das C4a-Fragment, das bei der proteolytischen Aktivierung von Komplement C4 entsteht – ein zentraler Schritt im klassischen und im Lektin-Komplementweg. Die Spaltung von C4 unterstützt die Bildung der C3-Konvertase und fördert nachgeschaltete Prozesse wie Opsonisierung, inflammatorische Signalgebung und die Clearance von Immunkomplexen. Unterschiede in Kopienzahl und Expression von C4A wurden mit Immundysregulation und veränderter Komplementaktivität in Verbindung gebracht, mit Relevanz für Autoimmunität und neuroinflammationsassoziierte Phänotypen. Als Marker der Komplementaktivierung wird C4a häufig genutzt, um das Zusammenspiel der angeborenen Immunität mit adaptiven Antworten sowie Mechanismen der Gewebeschädigung zu untersuchen.

Das C4a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C4A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C4A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C4A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C4a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C4A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C4a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C4A-Exone abzielen, die für die C4a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C4A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C4a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C4a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C4A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C4a HDR-Plasmid (h) und C4a HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C4A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C4A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.