C4a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402428

Panoramica

Il componente 4A del complemento (C4A) codifica il frammento C4a generato durante l’attivazione proteolitica del complemento C4, un passaggio centrale nelle vie del complemento classica e della lectina. La scissione di C4 favorisce la formazione della C3 convertasi e promuove a valle l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e la rimozione dei complessi immuni. Variazioni nel numero di copie e nell’espressione di C4A sono state associate a disregolazione immunitaria e ad alterata attività del complemento, con rilevanza per l’autoimmunità e per fenotipi legati alla neuroinfiammazione. Come indicatore dell’attivazione del complemento, C4a è comunemente utilizzato per studiare il dialogo tra immunità innata e risposte adattative e i meccanismi di danno tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C4a (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C4A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C4A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C4A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C4a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C4A per lo studio della segnalazione di C4a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C4A critici per la funzione di C4a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C4A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C4a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C4a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C4A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C4a Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C4a (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C4A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C4A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.