C3aR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401448-ACT

C3AR1 kodiert den Komplementrezeptor für Komponente 3a, Rezeptor 1 (C3aR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der das Anaphylatoxin C3a bindet und so die Komplementaktivierung mit der zellulären Signalübertragung verknüpft. Die Aktivierung von C3aR löst Signalwege aus, darunter Gαi/Gαq‑vermittelte Kalziumflüsse, MAPK/ERK‑ und PI3K‑Signalgebung, und beeinflusst dadurch die Chemotaxis von Leukozyten, die Zytokinfreisetzung und die Aktivierung myeloider Zellen. Dieser Rezeptor integriert das angeborene Immunsensing mit einer Verstärkung der Entzündungsreaktion und kann zudem die Endothelaktivierung sowie Gewebeumbauprozesse beeinflussen. Eine dysregulierte C3AR1‑Aktivität wurde mit der Biologie entzündlicher und immunvermittelter Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Modellen chronischer Entzündung und mikroumgebungsgetriebener Pathologie unterstützt.

C3aR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C3AR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C3aR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C3AR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C3AR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C3aR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C3AR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C3aR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C3aR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C3AR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.