Plásmido CRISPR de Activación (h) C23 (Nucleolin): sc-400191-ACT

NCL codifica C23 (nucleolina), una fosfoproteína nucleolar abundante que coordina la biogénesis de ribosomas mediante la transcripción de rDNA, el procesamiento del pre-rRNA y el ensamblaje de las subunidades ribosomales. Más allá del nucléolo, la nucleolina regula la organización de la cromatina, las respuestas al daño del ADN, la estabilidad del mRNA y el transporte nucleocitoplasmático, lo que la vincula con la progresión del ciclo celular y la adaptación al estrés celular. En algunos contextos, también participa en la señalización y el tráfico en la superficie celular, influyendo en la dinámica de los complejos ARN–proteína y en el control de la traducción. La expresión o localización desregulada de la nucleolina se asocia con frecuencia a fenotipos proliferativos, inestabilidad genómica y alteraciones del metabolismo del ARN, lo que la hace relevante para estudios de biología del cáncer y de vías de estrés neurodegenerativo.

C23 (Nucleolin) El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C23 (Nucleolin) El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C23 (Nucleolin). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C23 (Nucleolin) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C23 (Nucleolin) en células tumorales con expresión de NCL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.